Biblioteca Digital de Teses e Dissertações

Título: Produção e validação de Plasma rico em Plaquetas Canino Liofilizado para fins de utilização terapêutica
Autor: Maior, Maria Márcia Morais Souto
Programa: Mestrado Em Ciências Médicas
Data da defesa: 13/12/2019

Orientador:
Martins, Leonardo Tondello

Banca examinadora:
Pena, Paulo Felix De Almeida
Tavares, Kaio Cesar Simiano

Resumo: Nos últimos anos, a medicina regenerativa tem crescido em pesquisa, aplicabilidade e desenvolvimento, tornando-se um campo de intenso estudo na busca de intervenções capazes de auxiliar e melhorar o processo de cicatrização. Nesse cenário, a utilização de plasma rico em plaquetas (PRP) tem se mostrado bastante promissor, pois as plaquetas são responsáveis pela produção e liberação de vários fatores de crescimento capazes de facilitar a regeneração de tecidos. Uma grande limitação ao uso do PRP é a disponibilidade do mesmo, tendo em vista que o PRP fresco não pode ser armazenado por longos períodos e há muitas vezes a necessidade de obtenção do PRP de fonte autóloga do paciente que irá utilizar. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo de obtenção de PRP liofilizado canino capaz de manter propriedades de viabilidade pós reconstituição. Para tanto foram testados diversos protocolos de extração e liofilização do PRP, com intuito de obtenção de PRP canino com pouca quantidade de outras células e cuja liofilização fosse capaz de preservar as características do PRP quando reconstituído. Para validação do PRP canino liofilizado foi analisado a concentração dos fatores de crescimento VEGF e TGF-ß antes e após o processo de liofilização, a estrutura tridimensional do PRP liofilizado reconstituído em forma de gel sob microscopia eletrônica e sua capacidade de suporte para proliferação de células-tronco mesenquimais em teste de cultivo in vitro. Os resultados demonstraram que o PRP liofilizado foi capaz de, ao ser reconstituído, apresentar concentrações terapêuticas adequadas dos fatores de crescimento VEGF e TGF- ß (9,1 pg/mL e 6161,6 pg/mL, respectivamente). O gel de PRP reconstituído após liofilização apresentou uma durabilidade in vitro de 10 dias e sua estrutura tridimensional mostrou-se semelhante a do PRP fresco. Ainda, o gel de PRP proporcionou uma intensa proliferação de células-tronco mesenquimais ao longo de todo o período de cultivo. Os achados foram muito promissores e sugerem a possibilidade de uso de PRP canino na forma liofilizada como arsenal terapêutico potencial. Novos estudos deverão ser conduzidos para comprovação terapêutica in vivo do PRP canino liofilizado. Palavras-chave: regeneração, cicatrização, plasma rico em plaquetas e liofilização.

Abstract: In recent years, regenerative medicine has grown in research, applicability and development, becoming a field of intense study in search of interventions capable of helping and improving the healing process. In this scenario, the use of platelet rich plasma (PRP) has been very promising, as platelets are responsible for the production and release of various growth factors that facilitate tissue regeneration. A major limitation to the use of PRP is its availability, as fresh PRP cannot be stored for long periods and there is often a need to obtain PRP from the patient's autologous source. The present work aimed to develop a protocol for obtaining lyophilized PRP capable of maintaining viability properties after reconstitution. For this purpose, several protocols of PRP extraction and lyophilization were tested, aiming to obtain PRP with little amount of other cells and whose lyophilization was able to preserve the characteristics of the PRP when reconstituted. growth, the structure of the reconstituted lyophilized PRP and its effectiveness as a culture medium promoting cell multiplication. The results showed that the lyophilized PRP in the protocol applied in this study was able to be reconstituted to present adequate amounts of VEGF and GFT- ß; 9.1pg/ml and 6161.6pg/ml, respectively. The lyophilized PRP gel showed good durability (10 days), the three-dimensional structure. of lyophilized PRP was similar to fresh PRP and intense cell proliferation in the lyophilized PRP mesh. The results are very promising and suggest the possibility of developing PRP in lyophilized form as a potential therapeutic arsenal. Further studies are needed to validate the protocol in other animal species and clinical studies are also required for therapeutic confirmation of a lyophilized PRP derived product. Keywords: regeneration, healing, platelet-rich plasma and lyophilization.